一：吸光(guang)光(guang)度法
基于物質對不(bu)同波長的光波具有選擇(ze)性吸收的能(neng)力而建立起來的分析方(fang)法。
（一(yi)） 光線(xian)：
光(guang)線的波長(chang)： 200nm-400nm 紫外線*
400-750nm可見光(guang)*
>750nm 紅(hong)外線
光具(ju)有波(bo)粒(li)二相性，波(bo)長不(bu)同(tong)，其能量不(bu)同(tong)。
（二） 物質的吸收光譜及(ji)顏色：
1． 物質的(de)原子吸(xi)收(shou)光譜和原子發(fa)射光譜：原子的(de)最外層電(dian)子可以選擇性吸(xi)收(shou)特征波長的(de)電(dian)磁波成(cheng)為
激(ji)發(fa)態而產生的光(guang)譜稱為原(yuan)子(zi)吸(xi)(xi)收(shou)(shou)光(guang)譜。激(ji)發(fa)態原(yuan)子(zi)恢復(fu)到基態，則釋放出特(te)征波(bo)長的光(guang)子(zi)，形成原(yuan)子(zi)發(fa)射光(guang)譜。不(bu)同(tong)的溶(rong)液其光(guang)譜不(bu)同(tong)，即不(bu)同(tong)溶(rong)液對不(bu)同(tong)波(bo)長的光(guang)其吸(xi)(xi)收(shou)(shou)能力不(bu)同(tong)，對某一(yi)特(te)定波(bo)長的光(guang)存在吸(xi)(xi)收(shou)(shou)峰。
2． 可見光由赤(chi)橙黃綠(lv)青蘭紫等能量不同的光線組成(cheng)，當可見光穿過(guo)某一溶液時(shi)，由于特(te)定波(bo)長的
光被吸收(shou)而使溶液呈現相應的顏(yan)色。（如(ru)CuSO4由于吸(xi)收了(le)可見光中的黃光(600nm)而成藍色）不(bu)(bu)同(tong)顏色的溶液對(dui)不(bu)(bu)同(tong)波長的光其吸收(shou)能(neng)力(li)不(bu)(bu)同(tong)。
（三） 光吸(xi)收的(de)基(ji)本定律(lv)（Lambert-Beer 定律）：
一束平(ping)行單(dan)色光（Io）通(tong)過有色的透明溶(rong)(rong)液時(shi)，一部分的光(guang)可以透過溶(rong)(rong)液（It），另(ling)一(yi)部分被溶液吸收（Ia）,還有一部分(fen)被(bei)器皿表面反射（Ir）,則：
Io=It+Ia+Ir 。那么，該溶液透光率為(wei): T = It / Io 。
1． Lambert 定律：設(she)有一(yi)束平行單色(se)光,通(tong)過液層厚度為b 的均勻透明溶液,則溶液對光的吸收能力:
A=Ig(Io/It)=Ig(1/T)=k2b
k2 為(wei)吸光(guang)系(xi)數，為(wei)常數。與入射光(guang)波長(chang)、溶液性質(zhi)、濃(nong)度(du)(du)和溫度(du)(du)有關；A 為吸光(guang)度（又(you)稱光(guang)密(mi)度
O.D 或消(xiao)光度(du)E），當入(ru)射(she)光波長、吸光溶液的(de)濃度和溫度一定時，A 與(yu)b 成(cheng)正比。
2． Beer 定律(lv)：設有一束平行單(dan)色光,通過濃度為c 的(de)均勻(yun)透明溶液,則溶液對光的吸收能力:
A=Ig(Io/It)=Ig(1/T)=k4c
k2 為常(chang)數。由Beer 定律(lv)可知：當入(ru)射光(guang)波長、吸光(guang)溶液的厚(hou)度和溫度一定時，A 與c 成(cheng)正比(bi)。
3． Lambert-Beer 定律：綜(zong)合1.2.得： A=Kbc ,
即：當(dang)入射光(guang)波長、吸光(guang)溶液(ye)的(de)性質和溫度(du)一(yi)定時，A 與(yu)b、c 成正比(bi)。
（四） 吸光光度法(fa)的基本原(yuan)理(li)：
1、 不同物(wu)質，由(you)于其(qi)分子結(jie)構和原子組成不同，故對光的吸收(shou)光譜不同（如：CuSO4），在(zai)測定不(bu)同(tong)顏
色的(de)(de)物(wu)質濃度(du)時(shi)要用(yong)最大(da)吸收的(de)(de)波長的(de)(de)入射光，這樣測(ce)量的(de)(de)靈敏度(du)最高。
2、 同一種物質，若濃度不同，則對同一波長的(de)入(ru)射光(guang)的(de)吸(xi)收能力（吸(xi)光(guang)度）也(ye)不同，且成正比關(guan)系(xi)。
3、 應(ying)此，利用(yong)(yong)特定波(bo)長的單色光(guang)(guang)（通(tong)(tong)常用(yong)(yong)最大吸(xi)收波(bo)長的入射光(guang)(guang)）照射不同濃度(du)的某一溶液時(shi)，所得的吸(xi)光(guang)(guang)度(du)大小應(ying)與溶液濃度(du)呈線(xian)性(xing)關(guan)系(xi)(xi)，故(gu)可(ke)利用(yong)(yong)該(gai)線(xian)性(xing)關(guan)系(xi)(xi)通(tong)(tong)過計算或(huo)查標(biao)準曲(qu)線(xian)來求得未(wei)知(zhi)溶液的濃度(du)。
（五） 吸光(guang)光(guang)度法特點：
1． 靈(ling)敏度高：mg%級(ji)、甚至ug%級。
2． 準確度(du)高：誤差2-5%
3． 操作簡便、快速，儀器設備不復(fu)雜，價格低廉，故(gu)應用廣泛。
二 ：分(fen)光光度(du)計(ji)的使用(yong)：
（一(yi)） 分光(guang)(guang)光(guang)(guang)度計的(de)基本原理：利用吸光(guang)(guang)光(guang)(guang)度法(fa)的(de)原理，采(cai)用棱鏡(jing)或光(guang)(guang)柵(zha)等分光(guang)(guang)器(qi)獲得純度較(jiao)高的(de)單色(se)光(guang)(guang)
來測量未知(zhi)溶液的濃度的方法。
（二） 常(chang)用(yong)分光(guang)光(guang)度計(ji)：可見(jian)光(guang)、紫外、紅(hong)外分光(guang)光(guang)度計(ji)，
熒光(guang)(guang)分(fen)光(guang)(guang)光(guang)(guang)度(du)計(ji)，火焰分(fen)光(guang)(guang)光(guang)(guang)度(du)計(ji)等。
（三） 722 型分光光度計的(de)結構(gou)（略）
（四） 722 型分光光度計的(de)使用及注意事項
1、 插(cha)上插(cha)頭，接通電(dian)源，打開(kai)暗箱蓋，預(yu)熱(re)20min。
* 注意：分(fen)光(guang)光(guang)度計在接(jie)通電(dian)源而不用時(shi)，必須打開暗箱蓋，以(yi)免光(guang)電(dian)管老(lao)化(hua)。
2、 將準備好的試劑倒入(ru)(ru)比色杯中(zhong)，用吸水紙擦去(qu)比色杯外側(ce)水珠(zhu)，并(bing)依次放入(ru)(ru)比色杯架中(zhong)。
* 注意：手拿比色杯(bei)毛面(mian)，試(shi)劑倒入(ru)杯(bei)中(zhong)滿2/3 即可，不(bu)得將比(bi)色杯放在(zai)儀器上。
3、 調節(jie)所需波長，靈敏度(du)調至“1”，選擇旋鈕(niu)至“T”。
4、 調“0”：打開暗箱蓋，用調“0”旋(xuan)鈕調節。
5、 調(diao)“100%”：蓋上暗箱(xiang)蓋，用調(diao)“100%”旋(xuan)鈕調節(jie)，讓光線通過“空(kong)白(bai)管”。
6、 重復調“0”和調“100%”數次。
* 注意：若調不到“0”和“100%”，可將靈敏(min)度調至“2”或更高(gao)，不得用力強(qiang)行旋轉旋鈕，以免損壞。
7、 將選擇選扭由(you)“T”調(diao)至(zhi)“A”，此時(shi)讀數應(ying)由“100”至“0”，若不為“0”，可用“消光(guang)零”旋鈕調節。
8、 拉(la)(la)動拉(la)(la)桿，分別讀取“A 標”和“A 樣”。
9、 取出(chu)比色杯，棄去溶液，洗凈晾干，備(bei)用。
（五） 計算(suan)
1．利用標(biao)準管計算測定物含量：
A 樣=K 樣(yang)b 樣c 樣
A 標=K 標(biao)b 標c 標
因為入射(she)光的波長(chang)，溶液性(xing)質和溫度(du)以(yi)及(ji)比色杯的
厚度都(dou)一樣，即：K 樣(yang)=K 標(biao) b 樣=b 標
所以(yi)：A 樣/ A 標= c 樣/ c 標
得：c 樣= c 標(biao)×A 樣/ A 標
2． 利用標(biao)準曲線進行(xing)計(ji)算：
3． 偏離Lambert-Beer 定(ding)律(lv)的原(yuan)因(yin)
1） 由于非但色光引起(qi)的偏離(li)。
2） 由于(yu)溶液(ye)本身原因(yin)引起的偏離：
① 由于介質不均勻引(yin)起的偏離
② 由于溶液中化學反應引起的偏離(li)
三(san)：實驗(yan)：CuSO4 濃度(du)的測定
C 標= 比色波長=650nm
比色結果： A 標= A 樣=
計算：C 樣=C 標*A 樣(yang)/A 標